最近また帰りが遅い日々が続いております。
インバースPCRという新しいテクを始めたからです。
インバース？
Inverse?
逆とか反対とかの意味ですね。
また簡単に手順を書いていきますと…
ゲノムを制限酵素で切る
↓
精製
↓
セルフライゲーションさせる
↓
精製
↓
PCR
とまぁ書いてしまえば簡単。
でもこれが結構面倒くさい。
制限酵素が何種類も使うのである。
目的の遺伝子の配列にある制限酵素の認識部位が入っていたらアウトだから。
昨日は4塩基認識の酵素7種類。
今日は6塩基認識の酵素10種類。
この反応が2時間と長い。
ブチブチに断片化されたゲノムをセルフライゲーションさせるのね。
環状になる。
そしてプライマーを上流下流においてボン！
伸長時間が4分。
昨日4時間かかりました。
今日は酵素反応までしかやらなかったから、明日のPCRはさらに5分にするんだとか…
うへー、オーバーナイトにするしかないわな…