8/1 Mon
午前中にバッファーをつくるつもりだったが、大学に来たのが11時半。HPLCバッファーづくりは経験があるので、一応ひとりでできる。まだ慣れないので時間はかかる。例によって俺は昼に腹が減っていないので、Gさんとボスだけで昼飯は外食、かと思いきや、スーパーで弁当を買ってきた。そして、俺の分まで買ってきてくださった。昼は、GさんがHPLCを使っていたので、まだサンプルの洗浄はせずに待っていた。HPLCにサンプルをセットしたら終わりなので、夕方には帰れると思っていた。だが、バッファーをつくった直後に足りないと気付いて追加分をつくったり、サンプル数が多くて混合するのに手間取ったりして、あっという間に時間が過ぎた。極めつけは、HPLCが言う事を聞いてくれない。RUNを押した直後に、圧力を確認していなかったことに気づき、あわててRUNを押して強制終了した。そしたら止まったのだが、しばらくして「ドアが開いてるぜ！」というエラーが出て、ピーピー鳴り出した。どこも開いてないのに！ 困ったので、ケースタの打ち上げに行っているGさんに電話。電源を入れなおすことにした。エラー音は止んだが、今度はRUNボタンを押せない。強制終了したためか、「RINSE」を要求されているようだ。「RINSE」なんて知らないから、マニュアルで調べると、意味は分かったが、その方法が分からない。何度も電源を入れなおしたがダメで、だんだん嫌になってきた。もうどうでもいいやと思って、オートインクジョン装置の電源も入れなおした。そしたら、今度はRUNが押せた。やっとHPLCが動き出し、ケースタの打ち上げから帰ってきたボスやGさんに最低の醜態を晒さずに済んだ。ついさっき、やっと1つ目のサンプルの測定が終わり、問題なく測定できていることが明らかとなった。よかった、よかった。
8/2 Tue
昼過ぎに行ったら、HPLCのバッファーAのビンが傾けてあった。ボスに感謝。HPLCの測定はあと2本だったので、待ち時間は実験室でMやGさんとおしゃべり。印刷用紙がなくなったので、Nさんに新しいロールをセットしてもらい、印刷されなかった測定結果を印刷。ボスがつけた成績の最終確認の手伝い。Gさんのお土産の鳩サブレを食べた後、ボスとHPLCの結果を整理。Glu、Gln、GABA、メチオニンスルホンのピークを、それぞれの酵素に応じて印をつけ、1データごとに切っていく。そして、目的物質のAREAをExcelに入力し、メチオニンスルホンを基準にAREAの値を換算。10分、20分、40分における、0分との差を求め、時間を横軸に、生成物の量を縦軸に、グラフにプロット。すると、GADとGSは直線性を示したので、活性が測れていると示された。しかし、GABA-Tは0分から10分まで急上昇した後、40分まで少しずつしか上昇しない。これでは困るので、酵素反応の時間を2分、4分、8分、12分と小刻みでやることに。また、前回やったけどまだHPLCにかけてない、エンザイムソースの濃度を変えるバージョンもHPLCにかけることに。明日は、残った水ホモジネートを使って、総タンパク量の定量かな。
8/3 Wed
予定通り、総タンパクの定量、Lowry法を実施。3月にやって以来、5カ月ぶりなので、あまり覚えていない。ノートにまとめたメソッドを見ても、はじめのうちは解読できなかった。だが、Gさんに手伝っていただいたので、順調に進んだ。が、しかし、最後にフェノール試薬を入れる時に、器具の使い方が下手で、サンプルの2本だけ、全量が少なくなってしまった。よりにもよって、最も重要な2本でミスするなんて！ 最初からやり直し。肉液があと少ししかないので、これが最後のチャンス。LowryA液を加える手前でストップし、テンションが下がったまま、ラットの世話へ。スピード感はゼロだった。戻ってから、続行し、今度は無事に測定できた。さすが、Gさんのつくったスタンダードは、きわめて美しい直線を示した。タンパク量を計算で求め、各酵素の活性をmg protein、minuteあたりの生成物の物質量で表示した。腹が減ったから、もう帰ろう。明日は、GABA-Tのやり直し。あと、ラットを一斉に処理するらしいから、手伝いたいなぁ。
本日のミス：連続分注器の使い方が下手だった
8/4 Thu
予定通り、GABA-Tのやり直し。その前に、ラットの餌をGさん、Mさんと一緒に事務へ取りに行った。合計80kgの台車を押してきた。２人とボスはラットの一斉処理へ。俺はOと少しおしゃべりした後、15時過ぎに実験開始。基質溶液を調整した後、混合が甘かったことに気づき、やり直し。やや時間のロス。でも、17時半には終わった。欲張って、HPLCもやり始めた。だから、20時過ぎだけど、まだ帰れません。今、乾固中です。この後、pico tag希釈液で溶いて、サンプルチューブに詰めて、HPLCのRUNボタンを押して、無事に動くのを確認したら帰れます。嵐ちゃんは見たいなぁ。・・無理だった。大学を出たのが22時半になった。
本日のミス：１、HPLCの事前準備のときに、カラムをつけずにバッファーを流したので、テーブルが水浸しになった。２、サンプルチューブに移す時に、注射筒で吸ってフィルターを通すのだが、1本だけフィルターを付け忘れて注入してしまった。あわてて回収したが、容量不足。サンプルを1つ失うという最低のミスをした。
8/5 Fri
HPLCのバッファーは300mLしか作らなかったので、ギリギリだった。Ｂ棟との間を２往復したので、汗だらだらになった。HPLCが終わるまで、MやNさんの実験の手伝い。といっても、小さなエッペンチューブのフタの周りをパラフィルムで巻いただけ。ボス、ＧさんはＯの実験のため、動物舎へ。HPLCの結果が書かれた紙を整理。Excelに入力してる途中で時間となり、下校。今日は研究室のメンバーで初のカラオケ。3時間、楽しんできた。家族以外の人とカラオケに行くのは4年ぶりだな。