Magdalene
アンロック条件：１回のゲームで７つ以上の赤ハートのコンテナを手に入れる。
体力：赤ハートx4
攻撃：3.5
連射：10
発射速度：1.0
発射距離：23.75
歩行速度：0.85
運：0
初期拾得物：無し。アンロックでSpeed Upピル取得。
初期アイテム：Yum Heart
・「Magdalene」の名前
Magdaleneは聖書に登場するマグダラのマリアの名前。イエスの復活を見た女として有名だが、娼婦だった説があり、７つの悪霊をイエスに追い出してもらったエピソードがあり、アンロック条件の７ハートとなんらかの関連があるのかもしれない。
マグダラのマリアが娼婦だった、ということと、中ボスのLustの性病のようなデザインには何かIsaacの中で関係があるのだろうか・・・？「ダ・ヴィンチ・コード」のように復活のイエスと結婚したという説があるがこれは公式に認められてはいない。
なお???撃破エンディングやステージ間映像を見ての通り、Isaacのママのウィッグを身につけた姿と酷似している。
・基本的な特徴
★性能
Magdaleneはもっとも遅いキャラクターだが、HPはもっとも高く、アイテム「Yum Heart」で回復もできる体力重視型の性格をしたキャラクターである。
遅いといってもあまりにも遅いわけでもなく、またむしろ慣性がそれほど適用されないので弾道が安定しやすいため、初心者に優しいキャラと言える。そもそもスピードアップアイテムが多い。
また回復手段があるため、ダメージを前提としたイベント（一部アイテム、呪い部屋、生贄部屋、献血機）を行うことが容易い。
悪魔部屋の取引もより多く行える。
★キャラクターアンロック方法
最大ハートを７つ取得することだが、HP回復アイテムやエターナルハートを多く取れる周回があれば問題なく解禁できるだろう。
★もうひとつのアンロック
Afterbirth † のチャレンジ「Aprils Fool」をクリアするとスピードアップピルがもらえる。
これは取得アイテムもアクティブアイテムもなにもかもランダムでデタラメな作用が出る中、全てのボスが「The Bloat」という難しすぎるチャレンジであり、多分このチャレンジに勝利できる実力があればスピードアップピル欲しいとはあまり思わない感ある。
・推奨アイテム
「
The Belt」などのスピードアップ系のアイテムは全て有用である。
回復の特性を生かして「
Placenta」や 「
Little C.H.A.D.」、「
Leech」 and「 
Charm of the Vampire 」を強化したり、「
Guppy's Paw 」でソウルハートに変換して高耐久力を得るのもあり。「
The Wafer 」を取れば子宮ステージ以降は安全だろう。
「 
Gimpy」「 
The Virus」などのダメージがトリガーとなるアイテムも有効であるが、これらは運に左右されるため、ダメージに見合った効果が得られるかは注意。
あるいはダメージを自ら与えて大きな効果を得るアイテム（「
Razor Blade 」「 
Kamikaze! 」）も有効だが、こちらも体力との相談だ。
初期アイテム「Yum Heart」と「
Habit」の組み合わせにより、ハート２つのダメージにつき１つ回復することができる。電池回復系はMagdaleneにとって助けとなるだろう。
攻撃力の高い悪魔アイテムと取引しやすい利点を有用すると意外とアタッカーに変化することもある。
・非推奨アイテム
逆にスピードダウン系のアイテムを用いると非常に遅くなり操作が難しくなる。特に「
Bucket of Lard's」は要注意だ。
ピルもSpeed Downを食らうとまずい。
また、「 
Dead Cat」や「
Abaddon」のように強制的に赤ハートを失うアイテムを用いると危険な場合がある、と攻略Wikiにはあるが、Abaddonの場合は強力なパワーアップとなるので装備次第といった感じだろう。ただ、Dead catは装備を誤ると蘇ったところで著しい弱体化となって詰みになる可能性がある。
・ボスアンロック＆アイテム解説
Maggyのアイテムは回復系に特化してることが多い。
・ボスラッシュクリア（Hardmode）
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「Maggy's Bow 」アンロック
ボスラッシュはYum's Heartを維持するならば２ウェーブでチャージされるので、１ターン１ダメージまでと決めておけば安心かと思われる。
アンロックアイテムの「Maggy's Bow」はパッシブアイテムであり、最大HPが１増え、赤ハートの回復が倍になるすわ恐ろしいアイテムである。半ハートなら１ハート分、１ハートなら２ハート、２ハートなら４ハート分の回復だ。
この性質のため、ハートを保管して取り出す「
The Jar」は無限にハートを量産できてしまう。
Yum's Heartにもその性質は受け継がれる。
・Mom's Heart or It Lives! 撃破（Hardmode）
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「Cute Baby」アンロック
心臓ボスは弾幕が遅めでシンプルなのでMagdaleneの遅さでも十分に対処可能である。
アンロックアイテムの「Cutet Baby」はCo-opアイテムであり、Buddy in a boxというアイテムでもオプションとして登場することがある。特質は不明。
・Satan 撃破（Hardmode）
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「Guardian Angel」アンロック
Satanは弾幕が速いため速さ対策をしておくのが吉である。
アンロックアイテムの「Guardian Angel」はパッシブアイテムで、Pretty flyやCube of Meatなどと同じ、回転して弾を防ぐ防御オプションである。威力が比較的高く、そして他の回転オプションの回転速度を速める効果がある。
・Isaac 撃破（Hardmode）
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「The Relic」アンロック
３段階目の光攻撃は速度がないと避けきれないので、速度対策は必須と言えるボス。遅い場合は中央になるべく待機し続けるしかない。
アンロックアイテムの「The Relic」はソウルハートを落としてくれるオプションである。とてもありがたいアイテムであり、???に優しい。
・The Lamb 撃破（Hardmode）
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「Maggy's Faith」アンロック
The Lambはゆるやかな弾幕なので速度が遅くても避けることは可能である。むしろ距離を取らない方が得策である。
アンロックアイテムの「Maggy's Faith」はトリンケットであり、所持したままフロアをクリアすると次ステージでエターナルハートが一つ与えられる。初期に現れるととても嬉しいアイテムである。
・??? 撃破（Hardmode）
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「Celtic Cross」アンロック
???はホーミング弾を大量に放つため、遅いとダメージをくらうかもしれないが、The Chestまでいけるのであれば問題ない強化がされてる可能性は高いだろう。
アンロックアイテムの「Celtic Cross」はパッシブアイテムであり、敵からのダメージをくらうと、運が良ければ７秒ほどのシールドが現れる。（献血機等は無効。）
Luck値を２７まであげると１００パーセントの確率で現れる。
・Mega Satan 撃破（Hardmode）
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「Rad Baby」アンロック
Mega Satanは基本的に弾幕ボスであるため、速度というよりは距離をどれくらい取れるかが鍵かもしれない。
Magdaleneは避けに弱く、赤ハート回復に強いキャラクターなので、天使部屋までの到達がやや難しい。後述のEuchalistを先にアンロックする手はある。
アンロックアイテムの「Red Baby」はCo-opアイテムであり、Buddy in a boxというアイテムでもオプションとして登場することがある。赤いハートを落とす。
・Hush 撃破（Hardmode）
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「Purity」アンロック
Hushは弾幕がそれほど早くないので初期速度のままでは苦戦しないが、あんまり遅いと連続してダメージを被る可能性があり要注意である。
全体的に性能が高くないと戦えないボスなので悪魔部屋を利用するのも一手である。
アンロックアイテムの「Purity」はMagdaleneのアイテムにしては珍しく攻撃特化アイテムである。４色のオーラのうち１色を放ち、色ごとに特定の性能を半端なく強化するアイテムである。ダメージを受けるとオーラと力を失うが部屋を帰るとまたランダムに１色のオーラの性能をまとうようになる。
赤色：＋４ダメージ
青色：−４発射間隔
黄色：＋０.５速度
橙：＋７.５発射距離 ＋１.０高さ
・Derilium 撃破（Hardmode）
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「Eucharist」アンロック
Deriliumはラスボスの中でも最速なためうっかりダメージを被るケースが多くある。
このため回復や容量を多くするのは戦略的に正しいともいえる。
アンロックアイテムの「Eucharist」は常にボス戦後に天使部屋を召喚するアイテムである。Mega Satan戦に優しいのは言うまでもないが、天使アイテムは当たるとかなりの強化がされるので非常に良いゲームが期待できるだろう。
・Ultra Greed 撃破
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「Censer」アンロック
Greed modeはアクティブアイテムの電池をその場で回復するため、ダメージを被ってもYum Heartですぐさま回復できる。
また、トゲトゲの呪い部屋を通過して全回復するということができるので早いうちに鍵やボムを取得しやすくなるだろう。
アンロックアイテムの「Cencer」はオプション武器であり、敵やショットの速度を遅くする光を放つ神アイテムである。
ボス自体の動きを遅くすることはできないが、ボスの弾は遅くできる。
BFFS!と組み合わせて巨大化するとほとんどダメージを喰らわないゲームができる。
・Ultra Greedier 撃破
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「Glyph of Balance」アンロック
Ultra Greedierは極めて激しい爆弾攻撃でかなりの体力が削られるため速度を早くした方がよい。
アンロックアイテムの「Glyph of Balance」はパッシブアイテムであり、チャンピョンモードの敵のドロップするアイテムが、アイザックの不足分に合わせてそれを補填する形で現れるという過保護気味なアイテムである。たとえば赤いハートHP無しにソウルハートが２つ未満の場合はソウルハートに、HPが半ハートしかない場合には赤ハートに。
The Lostがこれを取得した場合、常にソウルハートしか出ないということになる。こうなってしまうとかなりプレイに支障を来たすのでThe Lostは取得してはならない。
・Hade mode コンプリート
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「Colorful Baby」アンロック
アンロックアイテムの「Colorful Baby」はCo-opアイテムであり、Buddy in a boxというアイテムでもオプションとして登場することがある。登場するとアイザックが全回復する。