残留DNA増加？(・∀・)こわっ

https://twitter.com/patent_sun/status/1751291700121850050?s=46&t=xQQsAPWa18kqHvAOUL6pBg

@Kevin_McKernan
We discovered a pivotal new patent application related to the EMA document. We call further verification for this patent by experts and volunteers.

The DNA contamination is a major concern in the mRNA vaccine technology. The patent we discovered this time… pic.twitter.com/TkbxyPBsDY

— Patent SUN (@Patent_SUN) 2024年1月27日

@Kevin_McKernan

私たちは、EMA 文書に関連する極めて重要な新しい特許出願を発見しました。私たちは、専門家やボランティアによるこの特許のさらなる検証を呼びかけます。

DNA 汚染は、mRNA ワクチン技術における大きな懸念事項です。今回発見した特許は、RNAの品質と収量を向上させるだけでなく、残存DNAも向上させる新たな方法を開示している。これは、この方法が mRNA ワクチンの DNA 汚染の主な原因の 1 つであることを示唆しています。

特許公開番号はUS20230183769A1です。すべてのリンクは最後の投稿に添付されます。

US20230183769A1は2022年8月23日に出願され、2023年7月23日に公開されました。この特許出願はまだ登録されていません。

この特許は、BioNTech (Pfizer) の BNT162b1 および BNT162b2 に関する EMA 文書の基礎となる実験を開示しており、残留 DNA 汚染問題の 1 つの核心に到達します。

この特許とEMA文書の開示に基づくのであれば、BioNTechとPfizerは、自社の製造方法により残留DNAが増加することを認識している。

つまり、BioNTech（ファイザー）は、必然的に残存DNA量が増加する製造方法を採用しながら、残存DNA量を過小評価するqPCRとRNA量を過大評価する蛍光測定法を採用することで、残存DNA量を極めて少なく見せている。

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https://twitter.com/patent_sun/status/1751292121779458287?s=46&t=xQQsAPWa18kqHvAOUL6pBg

BioNTech articulates the trade-off between an improving the RNA quality and an increasing the residual DNA in relation to a concentration of CTP (cytidine triphosphate), in the para [0437] and the figure 16 of this patent.

[0437]…Both RNA yield and integrity increased with… pic.twitter.com/GyU88SIOdo

— Patent SUN (@Patent_SUN) 2024年1月27日

BioNTech は、こ​​の特許の段落 [0437] と図 16 で、CTP (シチジン三リン酸) の濃度に関連した RNA 品質の改善と残留 DNA の増加の間のトレードオフを明確に示しています。

【0437】 …ＲＮＡ収量および完全性の両方は、より高いＣＴＰ開始濃度で増加したが、ｄｓＲＮＡ含有量は、より高いＣＴＰ濃度で​​減少した。残留ＤＮＡは、より高いＣＴＰ開始濃度とともに増加した（図１６）。

BioNTech では、残存 DNA の増加について次のように推測しています。

【0437】 …いずれかの理論に束縛されるものではないが、DNase Iの活性が、例えば、より低い遊離マグネシウムカチオンレベルから低下するため、より高いCTP開始濃度で残留DNAが増加した可能性がある。

図１６は、０％、＋１０％、＋２０％および＋５０％のＣＴＰ濃度で​​測定された残留ＤＮＡ量を示す。これらの濃度は、EMA 文書に示されている IVT 条件に対応しています。図 16 の全体的なプロセス条件を表 2.1 に示します。

EMA の文書によると、BioNTech は DNA 残存量を計算する際に均一分母を 30 μg と仮定した概算を使用しています。したがって、図 16 に示す DNA 残存量は、その計算方法に従って計算されたものと考えられます。

一方、BioNTech は段落 [0341] および [0342] で CTP および ATP (アデノシン三リン酸) の具体的な量を開示しています。表 2.4 では、CTP の量は 144 mL/L 開始容量に設定されています。これらの金額は、EMA 文書で許容範囲として示されている金額と一致します。

EMA 文書に示されている CTP および ATP の濃度の許容範囲が、この特許に開示されている実験結果に基づいていることは明らかです。これらの許容範囲は、RNA の品質は向上しますが、残留 DNA が増加する範囲です。

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https://twitter.com/patent_sun/status/1751292335248593241?s=46&t=xQQsAPWa18kqHvAOUL6pBg

The figure 2 (see para [00046]) discloses the construct 1 as BNT162b1 and the construct 2 as BNT162b2. On the other hand, the figures 16 and 18 disclose the constructs X as the DNA templates, but it is not identified which one was applied.

Note that BNT162b1 is the mRNA of 1262… pic.twitter.com/aOy8YEOZsq

— Patent SUN (@Patent_SUN) 2024年1月27日

図 2 (段落 [00046 ])を参照。適用されました。

なお、BNT162b1はスパイク領域の一部を翻訳する1262ntのmRNAであり、BNT162b2とは設計が異なる。 BNT162b1、BNT162b2 はいずれもプロセス 1、2 とはコンセプトが異なります。

図１６はプロテイナーゼＫ処理直後のデータを開示しており、ＲＮＡ収量は理論的に計算された（段落［００４２３］および［００４３２ ])を参照。）ＲＮＡの完全性はデジタル液滴ポリメラーゼ連鎖反応（ｄｄＰＣＲ）によって評価された。

一方、図 18 では、IVT 後、DNA テンプレートが DNase を介して除去され、固定化磁気ビーズを使用して RNA が精製されました (パラグラフ [00428 ])を参照してください。さらに、RNA は水で溶出され、RNA 濃度はUV (Nanodrop) で測定し、IVT 収量を計算し、Agilent Bioanalyzer を使用して RNA の完全性を分析しました。

図 16 と図 18 に開示されている RNA 収量と DNA 残存量から、工程 1 と工程 2 は図 16 と図 18 のいずれかに該当すると推測されますが、測定結果が異なるため単純比較はできないと思われます。手順、測定方法、測定原理などが異なります。

これらの点につきましては、この特許情報をできるだけ早く国民に提供することを優先しているため、具体的な検証は行っておりません。これらについてはさらなる検証が必要です。

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8まであるのですが

興味ある方はご自分で見に行ってね