The same amounts of protein were loaded.
同じ量の蛋白が負荷された
The primary antibodies used in western blot were listed as follows:
rabbit anti-KHK (Proteintech,Chicago,IL,USA), rabbit anti-GLUT5 (Abcam, Cambridge, MA, USA), mouse anti-β-actin (Proteintech).
ウェスタンプロットで用いた一次抗体を以下に記載した
ウサギ抗フルクトキナーゼ抗体(プロテインテック社,シカゴ,イリノイ州,米国), ウサギ抗GLUT5抗体(アブカム社,ケンブリッジ,マサチューセッツ州,米国), マウス抗βアクチン抗体(プロテインテック社)
Western detection was using a Li-Cor Odyssey image reader.
ウェスタンプロットのイメージング検出にはライコア社製Odyssay蛍光撮影画像読影装置を用いた
The anti-mouse immunoglobulin G(IgG) and anti-rabbit IgG secondary antibodies were from Li-Cor.
抗マウスIgGと抗ウサギIgG二次抗体はライコア社製品だった
Cell proliferation assay 細胞増殖アッセイ
For cell growth assay, we measured the cellular ATP value to determine cell proliferation using CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay Kit(Promega, Fitchburg, WI, USA) according to the manual instructions.
細胞増殖分析には、Cell Titer-Glo luminescent Cell Viability Assayキット(プロメガ社,フィッチバーグ,ウィスコンシン州,米国)を用い取扱説明書に従い、細胞増殖を決めるために細胞内ATP値を測定した
(試薬で細胞溶解、代謝活性のある細胞由来のATP量を定量、発光試薬で存在するATP量に比例した発光シグナルで培養中の生存細胞数を測定)
ATP was detected using a fluorophotometer.
ATPは蛍光光度計を用いて検出した
Cells were seeded into the 12-well plate, and 1×105 in each well.
細胞は1プレート12ウェルの細胞培養プレートに種添加され1ウェル各々1×105だった
After cell culturing 48h, discard the culture medium, add normal cell culture for 2h, so that the cell internal ATP content tends to stabilize, and then add 400 μl luciferase, shake for 5 min, pour the liquid into the EP tubes.
48時間細胞培養後、培養培地を捨て、通常の細胞培養を2時間追加し、細胞内ATPが安定化する傾向にして、
そして400μlのルシフェラーゼを加え、細胞溶解のため5分間振動し、EPチューブに液体を注いだ
The ATP was detected by fluorescence detector..
ATPは蛍光検出器で検出した
Cell colony formation assay 細胞コロニー形成アッセイ
In the cloning assay, about 1.0 × 103 cells were cultured in six plate wells.
コロニー形成アッセイでは、約1.0×103の細胞を6つのウェルプレートのウェルで培養した
After treatments as specified in the results section, the cells were washed three times with PBS, poured into methanol at －20 °C for 6 min, and then washed three times with PBS, followed by fixation with crystal violet about 10 min
結果のセクションで定められた治療の後、細胞はPBSで3回洗われ、
6分間-20°Cでメタノールへ注がれ、PBSで3回洗われ、次にクリスタルバイオレットで約10分間固定された
Wound-healing assay 損傷治癒アッセイ(細胞浸潤アッセイ)
About 5 × 105 cells were added to each well of 6-well plate, and the next day cell monolayer was wounded by scratching with a 20 μL pipette tip.
6ウェルプレートの各ウェルに約5×105の細胞が加えられ、翌日単一層に培養された培養細胞に、20μLピペットチップで穴をあけた
The cells were washed three times with PBS and added serum-free medium.
細胞はPBS(リン酸緩衝生食水)で3回洗われ、無血清媒質が加えられた
The distances of cell migration were calculated by subtracting the distance between the wound edges at 24 h from the distances measured at 0 h.
細胞移動の距離は、0時間時点で測定した距離から24時間時点の損傷縁の間の差し引いた距離で計算した
Animal experiment 動物実験
We close 4-5 weeks, 19-20g, female BCLB/c mice, which were purchased from the Experimental Animal Center of Nanjing Medical.
南京メディカル実験動物センターから購入した4-5週齢,19-20g,雌BCLB/cマウスと決めた
Mice were administered with a standard, housed and maintained in pathogen-free house in a 12:12 h light-dark cycle.
マウスは、昼夜12:12時間サイクルで、無病原体に維持された、標準的な施設に収容された、管理だった
Temperature and humidity were maintained at 24±2°C and 50±5%, respectively.
温度と湿度は各々24±2°Cと50±5%に維持された
All mice were divided into three groups randomly: control (water without fructose, n=5), fructose-feeding group(15% fructose dissolved in water,n=5), and glucose-feeding group(15% glucose dissolved in water,n=5).
全マウスは無作為に3群に分けられた:対照群(無果糖の水,n=5), 果糖食餌群(15%果糖を溶解した水,n=5),ブドウ糖食餌群(15%ブドウ糖を溶解した水,n=5)
Expect for the different water, the standard laboratory chow was given to these three groups of mice.
水が違うことを除いては、標準実験動物飼料が3群のマウスへ与えられた
The same amount of 4T1/Luciferase cells was injected into the groin of all mice, and animal general status observation was monitored every day during the experiment.
同じ量の4T1/ルシフェラーゼ発現発光細胞がマウスの鼠径に注射され、動物の全身状態の観察が、実験中は毎日モニターされた
The second week of tumor formation, mice were imaged in vivo, focusing on the size and metastasis of primary tumor
腫瘍形成の第2週にマウスは原発腫瘍のサイズと転移に主眼をおいたバイオイメージングが撮られた
The specific operation is, anesthetize the mouse, the subcutaneous injection of luciferase substrate, in 10 min after the start of photography.
マウスに麻酔をして、皮下へルシフェラーゼ基質を注入する特別な手術が撮影開始後の10分に行われた
All animal studies were followed an approved protocol by Tianjin Cancer Institute and Hospital, in accordance with the principles and procedures outlined in the NIH Guide for the Care and Use of Laboratory Animals.
全動物の研究は、NIH(米国国立衛生研究所)の実験動物の管理と使用に関する指針で概説されている原則と手続きに従って天津癌研究センター病院によって承認されたプロトコールに従った
The IACUC approval number is E2015093.
ISCUC(international animal care and use committee:動物実験委員会)承認番号はE2015093
Statistical analysis 統計解析
SPSS 16.0 was used to evaluate the data, and the data were given as means ± SD.
データ評価のためSPSS16.0を使い、データは平均値±標準偏差で与えた
The standard two-tailed independent samples t -test was performed to compare the differences of groups, and the significance level was defined as p < 0.05 (* means p < 0.05, ** means p < 0.01).
標準両側独立サンプルt検定を群間差を比較するために実施し、有意差はp<0.05と定義した
All experiments were repeated at least three times.
全実験は少なくとも3回繰り返した
同じ量の蛋白が負荷された
The primary antibodies used in western blot were listed as follows:
rabbit anti-KHK (Proteintech,Chicago,IL,USA), rabbit anti-GLUT5 (Abcam, Cambridge, MA, USA), mouse anti-β-actin (Proteintech).
ウェスタンプロットで用いた一次抗体を以下に記載した
ウサギ抗フルクトキナーゼ抗体(プロテインテック社,シカゴ,イリノイ州,米国), ウサギ抗GLUT5抗体(アブカム社,ケンブリッジ,マサチューセッツ州,米国), マウス抗βアクチン抗体(プロテインテック社)
Western detection was using a Li-Cor Odyssey image reader.
ウェスタンプロットのイメージング検出にはライコア社製Odyssay蛍光撮影画像読影装置を用いた
The anti-mouse immunoglobulin G(IgG) and anti-rabbit IgG secondary antibodies were from Li-Cor.
抗マウスIgGと抗ウサギIgG二次抗体はライコア社製品だった
Cell proliferation assay 細胞増殖アッセイ
For cell growth assay, we measured the cellular ATP value to determine cell proliferation using CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay Kit(Promega, Fitchburg, WI, USA) according to the manual instructions.
細胞増殖分析には、Cell Titer-Glo luminescent Cell Viability Assayキット(プロメガ社,フィッチバーグ,ウィスコンシン州,米国)を用い取扱説明書に従い、細胞増殖を決めるために細胞内ATP値を測定した
(試薬で細胞溶解、代謝活性のある細胞由来のATP量を定量、発光試薬で存在するATP量に比例した発光シグナルで培養中の生存細胞数を測定)
ATP was detected using a fluorophotometer.
ATPは蛍光光度計を用いて検出した
Cells were seeded into the 12-well plate, and 1×105 in each well.
細胞は1プレート12ウェルの細胞培養プレートに種添加され1ウェル各々1×105だった
After cell culturing 48h, discard the culture medium, add normal cell culture for 2h, so that the cell internal ATP content tends to stabilize, and then add 400 μl luciferase, shake for 5 min, pour the liquid into the EP tubes.
48時間細胞培養後、培養培地を捨て、通常の細胞培養を2時間追加し、細胞内ATPが安定化する傾向にして、
そして400μlのルシフェラーゼを加え、細胞溶解のため5分間振動し、EPチューブに液体を注いだ
The ATP was detected by fluorescence detector..
ATPは蛍光検出器で検出した
Cell colony formation assay 細胞コロニー形成アッセイ
In the cloning assay, about 1.0 × 103 cells were cultured in six plate wells.
コロニー形成アッセイでは、約1.0×103の細胞を6つのウェルプレートのウェルで培養した
After treatments as specified in the results section, the cells were washed three times with PBS, poured into methanol at －20 °C for 6 min, and then washed three times with PBS, followed by fixation with crystal violet about 10 min
結果のセクションで定められた治療の後、細胞はPBSで3回洗われ、
6分間-20°Cでメタノールへ注がれ、PBSで3回洗われ、次にクリスタルバイオレットで約10分間固定された
Wound-healing assay 損傷治癒アッセイ(細胞浸潤アッセイ)
About 5 × 105 cells were added to each well of 6-well plate, and the next day cell monolayer was wounded by scratching with a 20 μL pipette tip.
6ウェルプレートの各ウェルに約5×105の細胞が加えられ、翌日単一層に培養された培養細胞に、20μLピペットチップで穴をあけた
The cells were washed three times with PBS and added serum-free medium.
細胞はPBS(リン酸緩衝生食水)で3回洗われ、無血清媒質が加えられた
The distances of cell migration were calculated by subtracting the distance between the wound edges at 24 h from the distances measured at 0 h.
細胞移動の距離は、0時間時点で測定した距離から24時間時点の損傷縁の間の差し引いた距離で計算した
Animal experiment 動物実験
We close 4-5 weeks, 19-20g, female BCLB/c mice, which were purchased from the Experimental Animal Center of Nanjing Medical.
南京メディカル実験動物センターから購入した4-5週齢,19-20g,雌BCLB/cマウスと決めた
Mice were administered with a standard, housed and maintained in pathogen-free house in a 12:12 h light-dark cycle.
マウスは、昼夜12:12時間サイクルで、無病原体に維持された、標準的な施設に収容された、管理だった
Temperature and humidity were maintained at 24±2°C and 50±5%, respectively.
温度と湿度は各々24±2°Cと50±5%に維持された
All mice were divided into three groups randomly: control (water without fructose, n=5), fructose-feeding group(15% fructose dissolved in water,n=5), and glucose-feeding group(15% glucose dissolved in water,n=5).
全マウスは無作為に3群に分けられた:対照群(無果糖の水,n=5), 果糖食餌群(15%果糖を溶解した水,n=5),ブドウ糖食餌群(15%ブドウ糖を溶解した水,n=5)
Expect for the different water, the standard laboratory chow was given to these three groups of mice.
水が違うことを除いては、標準実験動物飼料が3群のマウスへ与えられた
The same amount of 4T1/Luciferase cells was injected into the groin of all mice, and animal general status observation was monitored every day during the experiment.
同じ量の4T1/ルシフェラーゼ発現発光細胞がマウスの鼠径に注射され、動物の全身状態の観察が、実験中は毎日モニターされた
The second week of tumor formation, mice were imaged in vivo, focusing on the size and metastasis of primary tumor
腫瘍形成の第2週にマウスは原発腫瘍のサイズと転移に主眼をおいたバイオイメージングが撮られた
The specific operation is, anesthetize the mouse, the subcutaneous injection of luciferase substrate, in 10 min after the start of photography.
マウスに麻酔をして、皮下へルシフェラーゼ基質を注入する特別な手術が撮影開始後の10分に行われた
All animal studies were followed an approved protocol by Tianjin Cancer Institute and Hospital, in accordance with the principles and procedures outlined in the NIH Guide for the Care and Use of Laboratory Animals.
全動物の研究は、NIH(米国国立衛生研究所)の実験動物の管理と使用に関する指針で概説されている原則と手続きに従って天津癌研究センター病院によって承認されたプロトコールに従った
The IACUC approval number is E2015093.
ISCUC(international animal care and use committee:動物実験委員会)承認番号はE2015093
Statistical analysis 統計解析
SPSS 16.0 was used to evaluate the data, and the data were given as means ± SD.
データ評価のためSPSS16.0を使い、データは平均値±標準偏差で与えた
The standard two-tailed independent samples t -test was performed to compare the differences of groups, and the significance level was defined as p < 0.05 (* means p < 0.05, ** means p < 0.01).
標準両側独立サンプルt検定を群間差を比較するために実施し、有意差はp<0.05と定義した
All experiments were repeated at least three times.
全実験は少なくとも3回繰り返した