Results 結果
Isolation of dermatophyte strains showing reduced susceptibility to terbinafine.
テルビナフィン感受性の低減を示す皮膚糸状菌株の分離
A total of 1,644 T. rubrum and 412 T. interdigitale clinical isolates, which were mainly collected from patients with tinea pedis or tinea unguium, were tested for growth ability on Sabouraud dextrose agar (SDA) containing 0.2 μg/ml terbinafine.
全部で1,644の紅色白癬菌と412の
トリコフィトンインテルディジタレ臨床分離株、そのほとんどは、足白癬または
爪白癬の患者から採取されたもので、
0.2 μg/mLテルビナフィンを含む
サブローデキストロース寒天培地(SDA)において増殖能力を検査した
Only 16 T. rubrum and one T. interdigitale isolate grew on the medium (Table 1).
16の紅色白癬菌と1つのT.インテルディジタレ分離株のみが培地上で増殖した
(Table1)
To investigate further the reduced terbinafine susceptibility of such strains, their squalene epoxidase (SQLE) genes were amplified by PCR and sequenced.
さらにそのような株のテルビナフィン感受性低減を調べるために、
スクアレンエポキシダーゼ(SQLE)遺伝子をPCRで増幅し塩基配列決定を行った
As shown in Table 1, the SQLE genes of all the strains were revealed to contain point mutations leading to amino acid substitutions at one of four amino acid positions
(Leu393, Phe397, Phe415, and His440) within the SQLE protein, strongly suggesting that a structural change in the SQLE protein might be involved in the reduced susceptibility of these strains to terbinafine.
Table1に示すように、全ての株のSQLE遺伝子は、
SQLE蛋白質内の、
4つのアミノ酸の位置の1つに、アミノ酸置換を導く、点突然変異を含むことが明らかになった
(393のロイシン、397のフェニルアラニン、415のフェニルアラニン、440のヒスチジン)
そしてそれは、
テルビナフィンへのこれらの株の低下した感受性には、
SQLE蛋白質における構造変化が、
関与した可能性を強く示唆していた
We used the length polymorphism of the tandem repetitive subelement 1 (TRS-1) and TRS-2 amplicons tentatively to differentiate T. rubrum resistant isolates carrying identical point mutations.
我々は、同一の点突然変異を運ぶ
紅色白癬菌耐性分離株を、暫定的に差別化するために、
タンデムリピート(直列反復配列)サブエレメント-1
(TRS-1)とTRS-2アプリコンの長多型
を用いた
The length polymorphism of TRS-1 allowed the differentiation of TIMM20083 and TIMM20093 from TIMM20084 and TIMM20094 (Fig. 1A).
TRS-1の長多型は、
TIMM20084 とTIMM20094 から、
TIMM20083 と TIMM20093 の差別化を可能にした(Fig1A)
These four strains carried identical A-to-T substitutions at position 1179 of the open reading frame (ORF) of the SQLE gene, leading to the replacement of Leu393 by Phe in the SQLE protein.
これらの4つの株は
SQLE蛋白質において、フェニルアラニンによる、393のロイシンの置換を導く、
SQLE遺伝子のオープンリーディングフレーム(ORF)の1179の位置に、
同一のAからTの置換を運んだ
The length polymorphism of TRS-2 allowed the differentiation of TIMM20086 from TIMM20092 (Fig. 1B).
TRS-2の長多型は
TIMM20092から、TIMM20086の
差別化を可能にした(Fig1B)
These two strains carried identical T-to-C substitutions in position 1189 of the open reading frame of the SQLE gene, leading to the replacement of Phe397 by Leu in the SQLE protein.
これらの2つの株は、
SQLE蛋白質においてロイシンによる397のフェニルアラニンの置換を導く、
SQLE遺伝子のオープンリーディングフレームの1189の位置の
同一のTからCの置換を、運んだ
TIMM20085 and TIMM20087, which carried identical C-to-A substitutions at position 1191 of the open reading frame of the SQLE gene, could not be differentiated.
TIMM20085 とTIMM20087は、SQLE遺伝子のオープンリーディングフレームの1191の位置に、
同一のCからAの置換を運んだが、区別はできなかった
Similar to TIMM20086 and TIMM20092, Phe397 was replaced by Leu in the SQLE protein.
TIMM20086 とTIMM20092と同様に、
SQLE蛋白質においてロイシンによる397のフェニルアラニンの置換があった
The MIC values, measured by the broth microdilution method,
varied from one isolate to another and appeared to depend on the detected mutation (Table 1).
MIC値は、分離株ごとに異なり、
微量液体希釈法によって測定し、検出された突然変異に依存した結果がみられた(Table1)
While the MIC values were almost the same for all Leu393Phe mutants, substantial differences were observed between Phe397Leu mutants.
393のロイシンからフェニルアラニンの変異では全て、MIC値は、ほとんど同じだった、
397のフェニルアラニンからロイシンの変異の間では、実質的差異が観察された
In particular, TIMM20092 showed a higher terbinafine tolerance than the other two Phe397Leu mutants (TIMM20085 and TIMM20086).
とりわけ、TIMM20092は、
他の2つの、397のフェニルアラニンがロイシンの変異
(TIMM20085 とTIMM20086)よりも、より高いテルビナフィン耐性がみられた
The MIC values of TIMM20095 (Leu393Ser), TIMM20087 (Phe397Leu), TIMM20097 (Phe397Val), and TIMM20098 (Phe415Ser) were not estimated because these isolates dramatically decreased their conidial productivity.
TIMM20095 (393のロイシンがセリン), TIMM20087 (397のフェニルアラニンが
ロイシン), TIMM20097 (397のフェニルアラニンがバリンl), TIMM20098 (415
のフェニルアラニンがセリン)のMIC値は推定しなかった、なぜなら、それらの分離株は、劇的に
それらの分生子生産性が減少したからだ
Point mutations detected in the SQLE gene of resistant strains confer resistance to terbinafine.
耐性株のSQLE遺伝子において検出された点突然変異はテルビナフィン耐性を授与した
We examined whether the single amino acid substitutions in the SQLE protein of the 17 Trichophyton isolates were involved in the terbinafine resistance phenotypes.
我々は17の白癬菌分離株のSQLE分離株における単一のアミノ酸置換が、
テルビナフィン耐性表現型に関与するかどうかを調べた
Point mutations corresponding to the amino acid substitutions in these isolates were introduced into the endogenous SQLE gene of a terbinafine-sensitive dermatophyte strain by genetic manipulations.
これらの分離株におけるアミノ酸置換に対応する点突然変異を、
遺伝子操作によって、テルビナフィン感受性皮膚糸状菌株の内在性SQLE遺伝子へ、導入した
To enhance the generation of such mutations, Arthroderma vanbreuseghemii was used as a recipient organism, for which a variety of more efficient genetic manipulation tools have been developed than for T. rubrum and T. interdigitale (14).
そのような変異の誘発を増強するために、アントロデルマバンブレセゲミをレシピエント菌(受容菌)
として用いた。
アントロデルマバンブレセゲミには、紅色白癬菌とトリコフィトンインテルディジタレよりも、様々なより有効な遺伝的操作が開発されてきたからだ
A. vanbreuseghemii, T. rubrum, and T. interdigitale SQLE
A.バンブレセゲミ,紅色白癬菌とトリコフィトンインテルディジタレSQLE
Isolation of dermatophyte strains showing reduced susceptibility to terbinafine.
テルビナフィン感受性の低減を示す皮膚糸状菌株の分離
A total of 1,644 T. rubrum and 412 T. interdigitale clinical isolates, which were mainly collected from patients with tinea pedis or tinea unguium, were tested for growth ability on Sabouraud dextrose agar (SDA) containing 0.2 μg/ml terbinafine.
全部で1,644の紅色白癬菌と412の
トリコフィトンインテルディジタレ臨床分離株、そのほとんどは、足白癬または
爪白癬の患者から採取されたもので、
0.2 μg/mLテルビナフィンを含む
サブローデキストロース寒天培地(SDA)において増殖能力を検査した
Only 16 T. rubrum and one T. interdigitale isolate grew on the medium (Table 1).
16の紅色白癬菌と1つのT.インテルディジタレ分離株のみが培地上で増殖した
(Table1)
To investigate further the reduced terbinafine susceptibility of such strains, their squalene epoxidase (SQLE) genes were amplified by PCR and sequenced.
さらにそのような株のテルビナフィン感受性低減を調べるために、
スクアレンエポキシダーゼ(SQLE)遺伝子をPCRで増幅し塩基配列決定を行った
As shown in Table 1, the SQLE genes of all the strains were revealed to contain point mutations leading to amino acid substitutions at one of four amino acid positions
(Leu393, Phe397, Phe415, and His440) within the SQLE protein, strongly suggesting that a structural change in the SQLE protein might be involved in the reduced susceptibility of these strains to terbinafine.
Table1に示すように、全ての株のSQLE遺伝子は、
SQLE蛋白質内の、
4つのアミノ酸の位置の1つに、アミノ酸置換を導く、点突然変異を含むことが明らかになった
(393のロイシン、397のフェニルアラニン、415のフェニルアラニン、440のヒスチジン)
そしてそれは、
テルビナフィンへのこれらの株の低下した感受性には、
SQLE蛋白質における構造変化が、
関与した可能性を強く示唆していた
We used the length polymorphism of the tandem repetitive subelement 1 (TRS-1) and TRS-2 amplicons tentatively to differentiate T. rubrum resistant isolates carrying identical point mutations.
我々は、同一の点突然変異を運ぶ
紅色白癬菌耐性分離株を、暫定的に差別化するために、
タンデムリピート(直列反復配列)サブエレメント-1
(TRS-1)とTRS-2アプリコンの長多型
を用いた
The length polymorphism of TRS-1 allowed the differentiation of TIMM20083 and TIMM20093 from TIMM20084 and TIMM20094 (Fig. 1A).
TRS-1の長多型は、
TIMM20084 とTIMM20094 から、
TIMM20083 と TIMM20093 の差別化を可能にした(Fig1A)
These four strains carried identical A-to-T substitutions at position 1179 of the open reading frame (ORF) of the SQLE gene, leading to the replacement of Leu393 by Phe in the SQLE protein.
これらの4つの株は
SQLE蛋白質において、フェニルアラニンによる、393のロイシンの置換を導く、
SQLE遺伝子のオープンリーディングフレーム(ORF)の1179の位置に、
同一のAからTの置換を運んだ
The length polymorphism of TRS-2 allowed the differentiation of TIMM20086 from TIMM20092 (Fig. 1B).
TRS-2の長多型は
TIMM20092から、TIMM20086の
差別化を可能にした(Fig1B)
These two strains carried identical T-to-C substitutions in position 1189 of the open reading frame of the SQLE gene, leading to the replacement of Phe397 by Leu in the SQLE protein.
これらの2つの株は、
SQLE蛋白質においてロイシンによる397のフェニルアラニンの置換を導く、
SQLE遺伝子のオープンリーディングフレームの1189の位置の
同一のTからCの置換を、運んだ
TIMM20085 and TIMM20087, which carried identical C-to-A substitutions at position 1191 of the open reading frame of the SQLE gene, could not be differentiated.
TIMM20085 とTIMM20087は、SQLE遺伝子のオープンリーディングフレームの1191の位置に、
同一のCからAの置換を運んだが、区別はできなかった
Similar to TIMM20086 and TIMM20092, Phe397 was replaced by Leu in the SQLE protein.
TIMM20086 とTIMM20092と同様に、
SQLE蛋白質においてロイシンによる397のフェニルアラニンの置換があった
The MIC values, measured by the broth microdilution method,
varied from one isolate to another and appeared to depend on the detected mutation (Table 1).
MIC値は、分離株ごとに異なり、
微量液体希釈法によって測定し、検出された突然変異に依存した結果がみられた(Table1)
While the MIC values were almost the same for all Leu393Phe mutants, substantial differences were observed between Phe397Leu mutants.
393のロイシンからフェニルアラニンの変異では全て、MIC値は、ほとんど同じだった、
397のフェニルアラニンからロイシンの変異の間では、実質的差異が観察された
In particular, TIMM20092 showed a higher terbinafine tolerance than the other two Phe397Leu mutants (TIMM20085 and TIMM20086).
とりわけ、TIMM20092は、
他の2つの、397のフェニルアラニンがロイシンの変異
(TIMM20085 とTIMM20086)よりも、より高いテルビナフィン耐性がみられた
The MIC values of TIMM20095 (Leu393Ser), TIMM20087 (Phe397Leu), TIMM20097 (Phe397Val), and TIMM20098 (Phe415Ser) were not estimated because these isolates dramatically decreased their conidial productivity.
TIMM20095 (393のロイシンがセリン), TIMM20087 (397のフェニルアラニンが
ロイシン), TIMM20097 (397のフェニルアラニンがバリンl), TIMM20098 (415
のフェニルアラニンがセリン)のMIC値は推定しなかった、なぜなら、それらの分離株は、劇的に
それらの分生子生産性が減少したからだ
Point mutations detected in the SQLE gene of resistant strains confer resistance to terbinafine.
耐性株のSQLE遺伝子において検出された点突然変異はテルビナフィン耐性を授与した
We examined whether the single amino acid substitutions in the SQLE protein of the 17 Trichophyton isolates were involved in the terbinafine resistance phenotypes.
我々は17の白癬菌分離株のSQLE分離株における単一のアミノ酸置換が、
テルビナフィン耐性表現型に関与するかどうかを調べた
Point mutations corresponding to the amino acid substitutions in these isolates were introduced into the endogenous SQLE gene of a terbinafine-sensitive dermatophyte strain by genetic manipulations.
これらの分離株におけるアミノ酸置換に対応する点突然変異を、
遺伝子操作によって、テルビナフィン感受性皮膚糸状菌株の内在性SQLE遺伝子へ、導入した
To enhance the generation of such mutations, Arthroderma vanbreuseghemii was used as a recipient organism, for which a variety of more efficient genetic manipulation tools have been developed than for T. rubrum and T. interdigitale (14).
そのような変異の誘発を増強するために、アントロデルマバンブレセゲミをレシピエント菌(受容菌)
として用いた。
アントロデルマバンブレセゲミには、紅色白癬菌とトリコフィトンインテルディジタレよりも、様々なより有効な遺伝的操作が開発されてきたからだ
A. vanbreuseghemii, T. rubrum, and T. interdigitale SQLE
A.バンブレセゲミ,紅色白癬菌とトリコフィトンインテルディジタレSQLE