会議名 : 第73回日本薬理学会北部会
演題 : Development of a novel anti-EpCAM monoclonal antibody for various applications
発表者 : Guanjie Li, Hiroyuki Suzuki, Mika K. Kaneko, Yukinari Kato
期日 : 2022年9月18日
会場 : 北海道科学大学A棟
上皮細胞接着分子(epithelial cell adhesion molecule, EpCAM)は、細胞膜に発現する糖タンパク質であり、様々ながん細胞で高発現が認められる。 EpCAMは細胞接着、増殖、生存、幹細胞性、腫瘍形成に関与することが報告されており、がんの診断と治療の有望な標的であると考えられている。本研究では、細胞基盤免疫選択法(Cell-Based Immunization and Screening method, CBIS法)を使用して、抗EpCAMモノクローナル抗体(mAb)の樹立を試みた。樹立された抗EpCAM mAbの1つであるrecEpMab-37(マウスIgG1, kappa)は、EpCAM発現CHO-K1細胞(CHO/EpCAM)や大腸がん細胞株(Caco-2)と反応が認められた一方、EpCAMノックアウトCaco-2細胞とは反応が認められなかった。またrecEpMab-37のCHO/EpCAM、及びCaco-2細胞への解離定数(KD)は、それぞれ2.0×10-8M、及び3.2×10-8Mであった。次に欠失変異体を用いたrecEpMab-37認識部位解析により、EpCAMの144〜164アミノ酸がrecEpMab-37の主要な認識部位であることが明らかになった。さらにrecEpMab-37は、ウエスタンブロット法、及び免疫組織化学によりEpCAMを検出可能であった。以上のようにCBIS法によって樹立されたrecEpMab-37は、EpCAMを特異的に認識し、様々な実験手法でEpCAMを検出できることが明らかになった。
会議名 : 第73回日本薬理学会北部会
演題 : Development of Monoclonal Antibody 281-mG2a-f Against Chinese/golden Hamster Podoplanin
発表者 : 鈴木裕之、李 冠傑、金子美華、加藤幸成
期日 : 2022年9月18日
会場 : 北海道科学大学A棟
Golden hamster (Mesocricetus auratus) is a small animal model of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) infections. Pathological analyses of the tissues are required to understand the pathogenesis of SARS-CoV-2 and the evaluation of therapeutic modalities, including neutralization monoclonal antibodies (mAbs). However, mAbs that recognize the golden hamster-derived antigens and distinguish specific cell types, such as the pneumocytes, are limited. Podoplanin (PDPN) is an essential marker of lung type I alveolar epithelial cells, kidney podocytes, and lymphatic endothelial cells. Here, an anti-Chinese hamster (Cricetulus griseus) PDPN mAb PMab-281 (IgG3, kappa) was established using the Cell-Based Immunization and Screening (CBIS) method. A defucosylated mouse IgG2a version of PMab-281 (281-mG2a-f) was also developed. The 281-mG2a-f strongly recognized both the Chinese hamster and the golden hamster PDPN using flow cytometry and could detect lung type I alveolar epithelial cells, lymphatic endothelial cells, and Bowman's capsules in the kidney from the golden hamster using immunohistochemistry. Furthermore, we examined the critical epitope of 281-mG2a-f, using enzyme-linked immunosorbent assay, and found that the binding epitope of 281-mG2a-f includes Ile75, Phe77, and Glu79 of Chinese hamster PDPN, which are shared with golden hamster PDPN. These results suggest the usefulness of 281-mG2a-f for analyzing the Chinese/golden hamster-derived tissues and cells for SARS-CoV-2 research.
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閉会