berry＊berry＊parfe -9ページ目

ベーグル＊

エルクワトロギャッツのベーグルセット注文しましたーーー

あー、おなかすいてきた、ヨガして早く寝ます。。

眠りの国の・・・＊

花粉・・・

なぜこんなに飛ぶの？？

花粉・・・

花粉症のせいか風邪気味なせいなのか

昨日から今日にかけてほぼ寝てます。

というか起きてる時間がほぼ無いです

もちろん授業も気付けば終わっていました・・・

発生はなんとか理解できるけど、

生理やばいーーー、なんで物理の公式とか出てくるんですか・・・いぢめ・・・。。

こつこつやらないと・・・

一応目標は卒業まで個も追試にならないことですから！！　※あくまで目標

↓難しそうやから買いません・・・

標準生理学/本郷利憲
￥12,600
Amazon.co.jp

でも前に書いたわんわん共和国は買いました！！

本当に玉木宏プチ写真集的です笑

癒されますーーーーーーーーーー

基本的に本屋さんが大好きでしょちゅう行くんですけど、

平積みの棚によくぶつかって脚にあざができるのが難点です

ほわーっとしてる私が悪いんですけど；；；

明日はお薬もらいに病院行きです

そのあとは同級生と飲み会

実習でいつも一緒になるメンバーなので楽しみ

といっても当分お酒飲んじゃダメなので、、、、でもてんしょん高めにいこっと

濃厚マフィン＊

バレンタインに焼いたマフィン

ＣＯＯＫＰＡＤのレシピは優秀です

さっき全学共通科目の合否発表があって、英語が２つとも受かってたので、

晴れて３回生への進級が決定しましたーーーーー

ほっと一安心デス

さぁー、発生学のためのファイルを買いにいこかな　←※形から入るタイプ

やる気まんまんやし、今日は勉強するーーーー

テスト＊

昨日のテスト・・・

レジュメを見ずに過去問だけ見ていたら・・・

できませんよ；；；

ＳＰＦ動物の維持法と微生物モニタリングが度忘れして書けなかったです

発生学も生理学も授業全然分からないので今日はでじっくり勉強して

遅れをとりもどします

ほんま医学書高すぎてすぐお金が飛びます・・・；；

あと、昨日はバレンタインいっぱい配って、喜んでもらえてよかったです

何人かはめっちゃ緊張しましたが・・・これも青春ということで！！

それから一番仲良しな同級生の下宿に行って、下宿熱が上がりました

私もがんばって４月から下宿目指します

友チョコ＊

チョコクッキー、アールグレイのクッキー、コーンフレークなどが入った苺のチョコです

今日、バレンタインからだいぶ遅れちゃいましたが、

いつもお世話になってる同級生に配ります

最近大学休んでたら、いろんなひとから「大丈夫？？」メールが来て、

すごく嬉しくて、

周りのひとたちをもっともっと大切にしたいなぁと思います

早起きして実験動物の勉強をはじめたものの・・・定義が難しい・・・

休憩がてらにブログ書いてます

実験動物学＊

たまには医学生らしいブログを・・・

明日は実験動物学のテストです・・・

↓大先輩がまとめてくれはったノートをもとにがんばります・・・。

でも今日は眠いのでまた明日・・・

実験動物学Ｔ　過去問と解答例

１．動物実験の再現性を確保するためにはどのような方法があるか？
動物実験においては再現性、客観性、実証性が示されて初めて真理とみなすことが出来る。その再現性を確保するために、まず動物実験動物における材料を検討する。

①	実験操作の斉一性…誰がやっても同じ結果が得られるという操作の簡便さが必要
②	実験動物の遺伝的統御…研究目的に応じた種や系統の選択が必要（遺伝的に均一な動物、すなわち遺伝組成が同じ動物の使用が望まれる）
③	環境の統御…特に重要なのは微生物的品質を一致させること（無菌動物、SPF動物、ノトバイオートのいずれを使用するか実験目的に応じて選択することが必要）
④	個体の統御…年齢（日齢・月齢も含めて）や性別、生理的時期を一致させることが必要

次に実験方法について検討することは、

①	実験因子の決定
②	実験区と対照区への動物の割り付け
③	飼育環境のコントロール
④	実験動物管理方法（給餌、給水を含む）
⑤	飼料の調整
⑥	実験操作（保定、麻酔、飼料の投与方法、飼料の採取、分析方法、外科手術および術後管理）
⑦	観察、測定の項目を出来るだけ詳細に記す
⑧	実験結果の形跡（統計的分析方法について詳細に）
⑨	実験終了時の処置
⑩	記録の方法と保管

などであり、以上の選択が実験の成否に関わる重要な問題である。

２．動物福祉と３つのRについて述べよ。
動物福祉の考え方は、科学的真理を認め、動物実験が人道的方法で行われ、必要最小限の動物を使うならばそれは許されるというものである。イギリスのRasselとBurchは、動物実験における倫理性の向上の目標として、著書「The Principle of Humane Experimental Technique」の中で以下に挙げる３つのRの思想を残した。

・	Replacement（代替）…可能な限り哺乳動物の代わりに、神経系をもたない寄生虫、微生物、培養細胞、さらには物理的方法を用いて研究を進めること。
・	Refinement（洗練）…麻酔の実施、適正な飼料管理、取扱者の訓練などによって動物の受けるストレス・苦痛を軽減させ、最終段階においては安楽死させるということ。
・	Reduction（減小）…実験計画を適切に立て、それぞれの研究目的に適した良質の動物を使用することでなるべく使用数を少なくすること。

この３R思想は、現代の動物実験における倫理的立場の代表的なものである。

３．近交系、亜系統、クローズドコロニーについて説明せよ。
【実験動物の系統】
　　┌近交系 Inbred strain
　　│　│　　亜系統 Substrain／亜系 Subline
　　│　├リコンビナント近交系 Recombinant inbred strains（RI strains）
　　│　├コンジェニック系統 Congenic strain
　　┤　├コアイソジェニック系統 Coisogenic strain
　　│　└コンソミック系統 Consomic strain
　　├ミュータント系 Mutant strain
　　├クローズドコロニー Outbred strain
　　└交雑群 Hybrid

・近交系（Inbred strain）
兄妹交配、親仔交配を20代以上継続したもの。近交系内の個体は、血縁係数・近交係数ともほぼ100％で、いずれも遺伝的にほぼ均一であるために、各種の実験条件に対して均一な反応が期待できる。また系統特有の遺伝的特質と反応を示すことから特定の研究目的に適した実験動物になりうる。
※血縁係数…個体間の遺伝子組成の相似度
近交係数…個体の遺伝子座がホモになっている率
・亜系統（Substrain）
近交系が枝分かれした後、それぞれ遺伝的に異なるか、異なる可能性があると考えられた時に命名する。
・亜系（Subline）
近交系や、その亜系が主に人為的な操作によって、環境・母性要因などが違っていると考えられた時に命名する。1993年の国際規定では特に言及されなくなった。
・リコンビナント近交系（Recombinant inbred strain：RI strain）
２つの異なる近交系を交配し（F₁）、その次の世代つまりF₂から再び兄妹交配を20代以上継続した系統群。親の近交系の遺伝子がホモ型で多様に組み換えられた近交系のセットができる。連鎖群分析、量的形質の遺伝解析に用いられる。
・コンジェニック系統（Congenic strain）
ある遺伝子座を含むゲノム領域が対象系統（ドナー系統）と異なる系統。特定の遺伝子マーカーや表現型を指標にして、ドナー系統にレシピエント系統を繰り返し戻し交配することによって得られる。このように人為的に作られたものをコンジェニック系統、点突然変異によって自然に生じたものをコアイソジェニック系統と、特に呼び分けている。

・ミュータント系（Mutant strain）
遺伝子記号をもって示される特定の突然変異形質を持つ系統、および選択淘汰によって特定の遺伝形質を維持することができる系統のことで、特性のある実験動物（ヒト疾患モデルなど）としての利用価値が高い。特定の突然変異遺伝子を保有しているものは、近交系として、また既存の近交系にこの遺伝子を導入した形で維持される。
・クローズドコロニー（Outbred strain）
５年以上外部から種動物を導入することなく一定の集団内のみで繁殖を続け、常時実験動物供試動物の生産を行っている群。大量生産が可能であるため、多数の動物を一時に使用して検討する生物検定用動物としても重要視される。集団内にある遺伝的変異が安定に維持されることを目標としている。循環交配方式などによって生産繁殖する。

・交雑群（Hybrid）
様々な交雑があるが、重要なのは近交系間交雑雑種第１代F₁（異なる系統を掛け合わせて生まれた子供）である。F₁は、個体における遺伝子型はヘテロ性が高く近交係数は低いが、個体間の遺伝子の一致率である血縁係数は近交系と同等である。一卵性双生児にたとえることができ、成長が安定し、表現型・演出型が一定である。
また、近交系間交雑雑種第２代F₂も、動物集団に含まれる遺伝的変異を人為的にコントロールできるため、毎回任意の遺伝的構成をもった動物群を再現でき、交雑群に新たな特性が発見された時にその解析が可能であるという点で、重要である。また、集団に含まれる遺伝的変異が大きくなるという点も忘れてはならない。

F₁について：

両親の近交系のいずれか一方の優性形質が表現されているので、優性形質を保有する一方の親の系統と同様の利用価値がある。遺伝分散が少なく、反応の均一性が得られる。生物検定用動物としての価値が高い。

４．遺伝的モニタリングとは何か？また、これにはどんなマーカーが使われるか？
遺伝的モニタリングとは、実験動物が正しく維持生産され、当初もっていた遺伝的均一性が保たれているかどうかを科学的かつ客観的に監視する検査のことをいう。これは、不測の事故による多系統との交雑、点突然変異などがおこって、近交系に遺伝的な変化がおこる可能性が必ずしもゼロとは言い切れないからである。
遺伝的モニタリングの方法は、標識遺伝子（marker genes）による各近交系の遺伝プロファイルを作成しておき、定期的にこれらに変化が無いかを調べるというものである。
標識遺伝子は近交系間で多型があるもの、遺伝子の判定が容易なもの、ヘテロの遺伝子型が判定できるものが望ましい。例としては、毛色遺伝子や、生化学的遺伝子（タンパク、電気泳動度の相違により分類）、免疫学的遺伝子（細胞膜抗原遺伝子、免疫グロブリン遺伝子）、DNAフィンガープリント、マイクロサテライトなどがある。

５．自然発生ミュータントの例をあげ説明せよ。
いろいろな手段を用いて健康な動物を病的状態に作り上げて実験に用いる代わりに、自然に現れた病気を有する動物を用いることがある。
例えば、ヌードマウスは先天的に胸腺を欠いている。そのため、Ｂ細胞機能こそ正常だが、Ｔ細胞による免疫機能は欠如し、マクロファージ、ＮＫ細胞は機能亢進している。これらは人の疾患のモデルとして研究され、ヌードマウスの場合、先天性胸腺欠損症、Ｔ細胞機能不全症、免疫学・腫瘍学・内分泌学の研究に利用されてきた。ヌードマウスはSPF環境でホモ・ヘテロの交配で維持・繁殖する。
また、高血圧自然発症ラットは、京都大学純系動物飼育室のウイスターラットから見つけられた高血圧のラットから選抜育種することによって、病理学の岡本教授らの手で作成された。脳卒中や脳出血・脳梗塞を高頻度で発症し、心筋梗塞、繊維症、小細動脈の肥厚・壊死、交感神経系・神経分泌系の機能亢進が多く見られる。常に血圧測定による選択圧がかけられている。複数の遺伝子が関与しているものと推察されている。

６．トランスジェニック動物（transgenic animal）について説明せよ。
トランスジェニック動物は、疾患モデル動物を開発するための分子遺伝学的手法の一つである。変化した遺伝子の機能を知るには、正常な遺伝子を完全に変異遺伝子で置き換えて、正常なタンパク質の無いところで変異タンパク質の機能を分析することがもっとも望ましいが、哺乳類の受精卵では変異遺伝子を注入しても遺伝子置換はほとんど起こらず、通常遺伝子付加が起こる（つまり正常な遺伝子も共に発現する）。この作り変えられた染色体が卵や精子に存在すれば、その子孫に代々取り込んだDNAを受け継ぐことになる。こうして永久的に変化した動物をトランスジェニック動物という。
トランスジェニック動物の作り方であるが、まず受精卵を取り出し、顕微鏡を見ながら雄性前核中にDNAを注入する。これは雄性前核のほうが大きく、作業がしやすいからである。そしてその受精卵を、交尾あるいはそれに値する刺激を与えてあらかじめ偽妊娠させておいた動物の子宮内に移植する。このうち生まれて生き残ったものがトランスジェニック動物となる。

７．｢ノックアウト動物｣｢gene targeting｣｢遺伝子組換え｣の語を用いて疾患モデル動物について説明せよ。
疾患モデル動物を研究することは、人の疾患の原因、発病機構、治療、予防の究明にとって非常に重要である。ノックアウト動物、遺伝子組み替えなどの遺伝子工学技術を用いて疾患の原因遺伝子あるいは関連遺伝子を突き止めることをgene targetingという。
ノックアウト動物とは、胚のICM（inner cell mass）から取り出した細胞にベクターを導入し、ある遺伝子に相同組換えを起こさせ、スクリーニング、クローニングをして目的遺伝子の組換えを起こしたES細胞のクローンをICMに再び戻し、その胚を仮親の子宮に着床させて生ませた動物である。これによって、例えばNODマウスは現在のところ、９つのI型糖尿病の関連遺伝子が見つかっている。

８．人畜共通感染症の例をあげよ。
動物の感染症には宿主特異性があり、どう動物種内の感染にとどまることが多いが、中には人と共通の病原性を持つ病気もあり、これを人畜共通感染症と呼ぶ。
・イヌブルセラ病
病原体はイヌブルセラ菌。犬の繁殖障害が起きる。ヒトへの感染経路は経口、経皮、眼、尿などである。ヒトがかかると発熱、寒気、倦怠感、頭痛、リンパ節の膨張などが症状としてあらわれる。４週間ほどの薬剤投与で治療できる。イヌブルセラ菌の検疫法としては、血液、尿中での菌の培養検査と、血清抗体検査の２つがある。検査期間は１ヶ月くらい。
・腎症候性出血熱
ハンターンウイルスというRNAウイルスによる疾患。げっ歯類や実験用ラットといった自然宿主ではほとんど病原性を示さないが、ヒトに感染すると２～４週間の潜伏期間の後、風邪のような症状で発症する。軽症の場合は３～４週間で治癒するが、重症の場合は出血と全身症状を示し死亡する場合もある。

９．無菌動物、ノトバイオート、SPF動物について説明せよ。
実験動物は、一見健康そうに見えても、体内にウイルスや細菌を保持しているものがある。このような動物を使用すると、実験による免疫機構の低下から発病し、実験が台無しになる恐れがある。そこで無菌動物（germ-free animal）やノトバイオート（gnotobiote）やSPF動物（specific pathogen-free animal）が利用される。その定義、作出方法、維持方法を以下の表に示す。

	定義	作出方法	維持方法
無菌動物	封鎖方式無菌処理して得られた、検出しうる全ての微生物、寄生虫のいない動物	元来は帝王切開ないしは子宮切断由来	アイソレーター
ノトバイオート	もっている微生物叢の全てが明確に知られている、特殊に飼育された動物	無菌動物に明確に同定された微生物を定着させる	アイソレーター
SPF動物	特に指定された微生物、寄生虫のいない動物（指定以外の微生物、寄生虫は必ずしもフリーではない）	無菌動物、ノトバイオートに微生物を自然定着させる	バリアシステム

10．微生物モニタリングとは何か。また、マウス、ラット、ウサギの感染例をあげよ。
実験動物の微生物学的状態（無菌、ノトバイオート、SPFなど）が変化していないことを定期的に確認するための検査のことである。以下のことが注意点として挙げられる。

・	検査は原則的に母集団からのランダムサンプリングによって行われるが、その数は統計学的に有為であることが求められる。
・	繁殖中、実験中の動物の場合、直接検査することは困難なので、退役動物（繁殖活動を終えたもの）やモニター動物を検査して間接的にモニタリングする。
・	検査の対象となる微生物は、病原性の弱いものも無視できない場合もある。

このモニタリングの結果は、動物の微生物学的品質を知る上での資料として重要である。また、これによって各飼育域の微生物学的汚染状態を知ることができるので、施設の運用にも役立つ。
感染例を以下に示す。

マウス：センダイウイルス病	マウスでは発病率、致死率共に高い。保有動物との接触によって急速に伝播。肺炎を起こす。特に治療法がないので淘汰することが望ましい。
ラット：腎症候性出血熱	ハンターンウイルスによる病気。多くのげっ歯類が有。自然宿主では病原性を示さない。ヒトが感染すると死亡することもあるので注意が必要。
ウサギ：コクシジウム病	寄生虫の一種。宿主によって種が異なる。ウサギの場合は腸と肝臓に寄生し、食欲不振、下痢を起こす。サルファ剤による治療、オーシストが有効。